Beschreibung*
Quantitative Bestimmung von Hepcidin-25 in humanem Plasma mittels ELISA
Ziel und Zweck der Untersuchung
Hepcidin-25 ist ein Peptid, welches eine wichtige Rolle in der Regulation der Eisen-Homöostase spielt. Das bioaktive Peptid besteht aus 25 Aminosäuren und wird vorwiegend in der Leber durch proteolytische Spaltung von Prohepcidin freigesetzt. Daneben entstehen durch weitere N-terminale Prozessierung kleinere Fragmente von 20-24 Aminosäuren, die eine stark reduzierte biologische Aktivität aufweisen und im Urin akkumulieren. Während Hepcidin-25 ursprünglich als antimikrobielles Peptid beschrieben wurde, gilt es inzwischen als wichtiger Regulator der Eisenaufnahme über die Nahrung und der zellulären Eisenfreisetzung. Die regulatorische Funktion von Hepcidin-25 beruht dabei auf seiner Wechselwirkung mit Ferroportin, dem wichtigsten zellulären Eisentransporter, der in der Membran von Makrophagen, Hepatozyten und auf der basalen Seite von Enterozyten lokalisiert ist. Hepcidin-25 induziert die Internalisierung und den Abbau von Ferroportin. Dadurch werden einerseits die intrazellulären Eisendepots aufgefüllt, und andererseits die Eisenaufnahme über die Nahrung reduziert, wodurch sich die Konzentration des im Kreislauf zirkulierenden Eisens verringert. Die Hepcidin-Synthese in der Leber wird vermindert, wenn es zu einem erhöhten Bedarf an zirkulierendem Eisen kommt. Dies geschieht unter anderem bei Eisenmangel, bei Hypoxie, bei Anämie und während der Erythropoese. Im Gegensatz dazu steigt die Hepcidin-Synthese bei Entzündungen oder nach Infektionen an. Die Bestimmung von Hepcidin-25 erweist sich bei der Differentialdiagnose verschiedener Krankheitsbilder als sehr hilfreich. So bewirkt ein Mangel oder eine Fehlfunktion von Hepcidin-25 die hereditäre Hämochromatose, die durch eine Eisenüberladung gekennzeichnet ist und im weiteren Verlauf zu einer Leberzirrhose führen kann. Weiterhin kann ein niedriger Hepcidin-25 Spiegel sowohl auf einer Eisenspeicheranämie als auch auf einer chronischen Hepatitis C beruhen . Umgekehrt finden sich hohe Hepcin-25-Spiegel bei Eisenmangelanämie, nach Infektionen, bei chronischen Nierenerkrankungen und nach intensiver sportlicher Belastung, die den häufig beobachteten Eisenmangel bei Sportlern erklärt.
Prinzip des Verfahrens
Der DRG Hepcidin 25 (bioactive) HS ELISA ist ein Festphasen-Enzymimmunoassay, der auf dem Prinzip der kompetitiven Bindung basiert. Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antikörper beschichtet, der gegen eine Antikörper-Bindungsstelle des Hepcidin-25-Moleküls gerichtet ist. Hepcidin-25 aus der Probe konkurriert mit dem Hepcidin-25-Biotin-Konjugat (Enzyme Conjugate) um die freien Bindungsstellen auf den beschichteten Wells. Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt und es folgt die Inkubation mit einem Streptavidin-Peroxidase-Enzymkomplex (Enzyme Complex). Nicht gebundener Enzymkomplex wird durch Waschen der Wells entfernt. Anschließend wird die Substratlösung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt. Die Intensität der gebildeten Farbe ist umgekehrt proportional der Hepcidin-25-Konzentration in der Probe.
Literatur
Scamuffa et al. Regulation of prohepcidin processing and activity by the subtilisin-like proprotein convertases Furin, PC5, PACE4 and PC7. Gut. 2008; 57(11):1573-82. Kroot et al. Hepcidin in Human Iron Disorders: Diagnostic Implications. Clin. Chem. 2011; 57:121650–1669. Nemeth et al. The role of hepcidin in iron metabolism. Acta Haematol. 2009; 122(2-3):78-86. Hentze et al. Two to tango: regulation of Mammalian iron metabolism. Cell. 2010; 142:24 –38. Swinkels et al. Synopsis of the Dutch multidisciplinary guideline for the diagnosis and treatment of hereditary haemochromatosis. Neth. J. Med. 2007; 65(11):452-5. Camaschella et al. Molecular mechanisms regulating hepcidin revealed by hepcidin disorders. Scientific World Journal. 2011; 11:1357-66. Girelli et al. Reduced serum hepcidin levels in patients with chronic hepatitis C. J. Hepatol. 2009; 51(5):845-52. Gardenghi et al. Ineffective erythropoiesis in beta-thalassemia is characterized by increased iron absorption mediated by downregulation of hepcidin and up-regulation of ferroportin. Blood. 2007; 109:5027–35. Uehata et al. Serum hepcidin-25 levels and anemia in non-dialysis chronic kidney disease patients: a crosssectional study. Nephrol Dial. Transplant. 2012; 27(3):1076-83.
Ergebniseinheit
ng/ml
Einheiten(sonstige)
nicht zutreffend
Synonyme
Hepcidin
Analysenfrequenz
wöchentlich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
4 Tage (wenn bei 2-8°C gelagert)
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Heparin
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
1 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
Lithium-Heparin Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
s.Beipack
Spezielle Präanalytik - Probentransport
Die Probennahme sollte nüchtern und morgens erfolgen, da Hepcidin im Verlaufe des Tages ansteigt (Labor und Diagnose 2020). Intern: Blut nach Abnahme mit Rohrpost ins ZIMCL übermitteln. Externe Einsender: Blutproben zentrifugieren und zellfreies Heparinplasma in ein sauberes Röhrchen überführen und gekühlt am gleichen Tag ins ZIMCL schicken.
Messbereich
1,149 - 81 µg/l
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Proben sollten nicht öfter als einmal eingefroren und wieder aufgetaut werden. Möglichst kein ikterisches, lipämisches bzw. hämolytisches Serum verwenden. Haemoglobin (bis 4 mg/mL), Bilirubin (bis 0.5 mg/mL) and Triglyceride (bis 7.5 mg/mL) haben keinen Einfluss auf das Messergebnis. Keine Medikamenten-Interferenzen lt. Hersteller bekannt. Kein High-Dose-Hook Effekt beobachtet.
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
Prohepcidin < 0.001% Insulin < 0.001% Hepcidin-22 24.2% Hepcidin-20 87.7%
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
CE-IVD
Für die zur Verfügung gestellten Informationen kann keinerlei Gewähr im Hinblick auf Aktualität, Korrektheit, Vollständigkeit oder Qualität übernommen werden. Haftungsansprüche, welche sich auf Schäden materieller oder ideeller Art beziehen, die durch die Nutzung oder Nichtnutzung der dargebotenen Informationen bzw. durch die Nutzung fehlerhafter und unvollständiger Informationen verursacht wurden, sind ausgeschlossen. Die Verwendung und Nutzung der Zusammenstellungen liegt daher alleine im Verantwortungsbereich des Anwenders/der Anwenderin, welche(r) das ZIMCL/tirol kliniken gegenüber Ansprüchen Dritter schad- und klaglos halten wird.