Beschreibung*
Nachweis von Hepatitis C Virus RNA in Serum mittels PCR
Ziel und Zweck der Untersuchung
Das Hepatitis-C-Virus ist ein einzelsträngiges Plus-Strang-RNA-Virus und Auslöser der häufig (~80%) chronisch verlaufenden Hepatitis C, welche im Verlauf zu schweren Leberschädigungen wie Leberzirrhose und Leberzellkarzinom führen kann. Sein Genom setzt sich aus etwa 9.500 Nukleotiden zusammen, die für 3.000 Aminosäuren kodieren. HCV ist ein hämatogenes Virus; die Übertragung erfolgt v.a. parenteral über Blut. Die hochsensitive PCR-Untersuchung auf HCV-RNA im Blut dient dem direkten Nachweis einer akuten bzw. chronischen Infektion und ermöglicht eine Beurteilung von Infektiosität sowie des Behandlungserfolgs unter Therapie.
Prinzip des Verfahrens
Der im ZIMCL eingesetzte Assay ist ein Nukleinsäure-Amplifikationstest mit transkriptionsvermittelter Echtzeit-Amplifikationstechnologie (TMA) zum Nachweis von HCV-RNA. Der Assay hat eine konservierte Region der 5'UTR des HCV-Genoms als Target und ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung der Genotypen 1, 2, 3, 4, 5 und 6. Der Assay ist gemäß dem 2. internationalen WHO-Standard für das Hepatitis-C-Virus (NIBSCCode 96/798) standardisiert. Der Assay umfasst die drei Hauptschritte Target Capture, Target-Amplifikation durch TMA und Detektion der Amplifikationsprodukte (Amplikons) mithilfe von fluoreszenzmarkierten Sonden (Torches).
Literatur
- Lauer GM, Walker BD. 2001. Hepatitis C virus infection. N Engl J Med 345:41-52. - Caruntu FA, Benea L. 2006. Acute hepatitis C virus infection: Diagnosis pathogenesis, treatment. JGLD 15:249-256. - Gretch D, del la Rosa D, Corey L and Carithers R. 1996. Assessment of Hepatitis C viremia using molecular amplification technologies. Viral Hepat Rev 2:85-96. - Young KKY, Resnick R and Myers TW. 1993. Detection of hepatitis C virus RNA by a combined reverse transcriptase-polymerase chain reaction assay. J Clin Microbiol 31:882-886.
Ergebniseinheit
Einheiten(sonstige)
IU/ml
Synonyme
HCV-PCR, Hepatitis C, Virushepatitis
Analysenfrequenz
1-2x wöchentlich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
Nicht möglich, da ein eigenes Röhrchen zur Durchführung übermittelt werden muss.
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Serum
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
4 ml Nativblut
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
Serum Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
nicht zutreffend
Spezielle Präanalytik - Probentransport
Frisch entnommene Proben (Vollblut) können vor dem Zentrifugieren bis zu 24 Stunden bei 2-25 °C gelagert werden. Vollblutproben müssen bei 2-25 °C transportiert und innerhalb von 24 Stunden nach der Entnahme zentrifugiert werden. Die Gewinnung und Aliquotierung von Serum erfolgt ausschließlich im ZIMCL in einem Laminar Airflow. Sekundärgefäße werden ausnahmslos zurückgewiesen.
Messbereich
10-100.000.000 IU/ml
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Bei Vorhandensein von Albumin (90 mg/ml), Hämoglobin (5 mg/ml), Triglyzeriden (30 mg/ml) oder unkonjugiertem Bilirubin (0,2 mg/ml) wurde keine Interferenz der Leistung des Assays festgestellt.
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
nicht zutreffen, siehe Anhang.
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
CE-IVD
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