Beschreibung*
Nachweis von Malaria-Plasmodien-DNA in EDTA-Vollblut mittels Real-time PCR
Ziel und Zweck der Untersuchung
Bei der Verdachtsdiagnose Malaria kann sich der mikroskopische Plasmodien-Nachweis schwierig gestalten und auch die Antigenbestimmung mittels Schnelltest lässt oft keine eindeutige Diagnosestellung zu. Der Nukleinsäurenachweis mittels PCR kann in solchen Fällen nicht nur zu einer Diagnosesicherung beitragen, sondern auch einen Zeitvorteil für den Beginn einer Therapie mit sich bringen. Die Indikation für den Plasmodien-DNA Nachweis besteht bei Fieber unklarer Genese bei Personen mit zurückliegendem Aufenthalt in Malaria-Endemiegebieten. Das im ZIMCL eingesetzt Verfahren ermöglicht den Nachweis folgender Plasmodien Species: falciparum, vivax, malariae, ovale, knowlesi.
Prinzip des Verfahrens
Der Nachweis erfolgt mittels einer Malaria-spezifischen Sonde welche an einem Ende grün (FAM) markiert ist und am anderen Ende einen Quencher trägt. Diese Sonde ist spezifisch für eine Untereinheit des Gens, das die 18s rRNA von P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale und P. knowlesi kodiert. Als interne Kontrolle dient ein zugesetztes DNA-Fragment, dessen korrekte Amplifikation mittels einer gelb (JOE) markierten Sonde überprüft wird. Es werden alle oben genannten Malaria Spezies erfasst, eine weitere Differenzierung kann allerdings mittels der eingesetzten Methode nicht erfolgen. Die Nachweisgrenze des Verfahrens liegt bei 0,5 IU Malaria Plasmodien DNA /µl EDTA-Vollblut (CI 95%: 0,14-1,35 IU/µl).
Literatur
- World Malaria Report 2011 (WHO) - Gatti et al. Annals of Tropical Medicine & Parasitology, Vol. 101, No. 3, 195–204 (2007). A comparison of three diagnostic techniques for malaria: a rapid diagnostic test (NOW Malaria), PCR and microscopy - Berry et al. Parasite, 2008, 15, 484-488. PCR-based Methods to the Diagnosis of imported Malaria - Wongsrichanalai et al. Am. J. Trop. Med. Hyg., 77(Suppl 6), 2007, pp. 119–127. A Review of Malaria Diagnostic Tools: Microscopy and Rapid Diagnostic Test (RDT) - Rougemont et al. Detection of Four Plasmodium Species in Blood from Humans by 18S rRNA Gene Subunit-Based and Species-Specific Real-Time PCR Assays. J. Clin. Microbiol. 2004; 47: 5636–5643.
Ergebniseinheit
Einheiten(sonstige)
Qualitativer Test (positiv, negativ)
Synonyme
Malaria-PCR Plasmodien-PCR
Analysenfrequenz
Abarbeitung erfolgt nach Probeneingang
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
72h (sofern ein Aliquot zur Durchführung einer PCR-Analyse hergestellt wurde)
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
EDTA-Vollblut
Sammelperiode
Keine
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
1 ml EDTA-Vollblut
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
nicht zutreffend
Spezielle Präanalytik - Probentransport
Probenanlieferung bei 2-8°C, nicht frieren, nicht aliquotieren. Keine Annahme von Sekundärröhrchen!
Messbereich
Qualitative Analyse: Zu erwartende Ergebnisse: negativ/positv
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
- Unzureichende Qualität und/oder Quantität des Probenmaterials - Heparin als Antikoagulans
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
Wie bei Hybridisierungsverfahren möglich, können Sequenzvarianten zu fehlerhaften Ergebnissen führen. Laut Hersteller sind keine Kreuzreaktionen mit anderen Parasiten bekannt.
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
IVD-CE
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