Beschreibung*
Quantitative Bestimmung der ADAMTS13-Aktivität (%) mittels FRET-Assay aus Citratplasma
Ziel und Zweck der Untersuchung
Von Willebrand Faktor (VWF) trägt zur Plättchenaggregation bei indem er die Bindung von Plättchen an der Gefäßverletzung unterstützt. Er besteht aus verschieden großen Untereinheiten (Multimere). Die Haftfähigkeit der Multimere steigt mit deren Größe. Das Enzym ADAMTS13 (Eine Disintegrin und Metalloproteinase mit Thrombospondin Typ 1, Motif 13) spaltet spezifisch die VWF Multimere und reguliert dadurch die Entstehung von hoch thrombogenen ultragroßen VWF-Multimeren. Dadurch werden die bis zu millimetergroßen Multimere kleiner und auch weniger reaktiv. Bei verminderter ADAMTS13-Aktivität können die unüblich großen VWF-Multimere durch die VWF-Plättchen Aggregation zu mikrovaskulären Thrombosen und Organfehlern, bis zum Organversagen führen. Im Gegenzug kann es zu einer mikroangiopathischen hämolytischen Anämie kommen, welche durch die Scherung der roten Blutkörperchen beim Passieren dieser Mikrothromben entstehen kann. ADAMTS13-Mangel kann vererbt oder erworben auftreten. Letztere Form vor allem durch ADAMTS13-Autoantiökrper welche die Thrombotisch Thrombozytopene Purpura (TTP) hervorrufen.
Prinzip des Verfahrens
Beim Technoclone TECHNOFLUOR ADAMTS13 Test spaltet ADAMTS13 aus der Probe ein VWF73-Substrat wobei ein dark quencher freigesetzt wird. Der Energietransfer, der die Fluoreszenz eines benachbarten Emitters auslöscht findet nicht statt, wodurch eine Fluoreszenzemission ermöglicht wird. Dieses Fluoreszenzsignal ist proportional zur ADAMTS13-Aktivität der Probe.
Literatur
Furlan et al. Blood. 1996 May 15;87(10):4223-34. Partial purification and characterization of a protease from human plasma cleaving von Willebrand factor to fragments produced by in vivo proteolysis. Furlan et al. N Engl J Med. 1998 Nov 26;339(22):1578-84. von Willebrand factor-cleaving protease in thrombotic thrombocytopenic purpura and the hemolytic-uremic syndrome. Levy et al. Nature. 2001 Oct 4;413(6855):488-94. Mutations in a member of the ADAMTS gene family cause thrombotic thrombocytopenic purpura. Sadler. Blood. 2008 Jul 1;112(1):11-8. von Willebrand factor, ADAMTS13, and thrombotic thrombocytopenic purpura. Zhang et al. Anal Biochem. 2006 Nov 15;358(2):298-300. Creation of a recombinant peptide substrate for fluorescence resonance energy transfer-based protease assays. Meyer et al. J Thromb Haemost. 2007 Apr;5(4):866-7. Hyperbilirubinemia interferes with ADAMTS-13 activity measurement by FRETS-VWF73 assay: diagnostic relevance in patients suffering from acute thrombotic microangiopathies. Li et al. External validation of the Plasmic score: a clinical prediction tool for thrombotic thrombocytopenic purpura diagnosis and treatment. J Thromb Haemost. 2018 Jan;16(1):164-169. Zheng et al. Effect of plasma exchange on plasma ADAMTS13 metalloprotease activity, inhibitor level, and clinical outcome in patients with idiopathic and nonidiopathic thrombotic thrombocytopenic purpura. Blood. 2004 Jun 1;103(11):4043-9. Matsumoto et al. Diagnostic and treatment guidelines for thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) 2017 in Japan. Int J Hematol. 2017 Jul;106(1):3-15. Geiter et al. Evaluation of a New Fully Automated ADAMTS13 Activity Assay. ISTH 2021 Congress. Abstract 2021. Llusa et al. Performance Evaluation of a New Fully Automated Fluorogenic ADAMTS13 Activity Assay. ISTH Congress 2020. Abstract 2020.
Ergebniseinheit
%
Einheiten(sonstige)
% (100% = 1,00 IU/ml)
Synonyme
TTP-Verdacht, ADAM-TS13, ADAMTS-13, C9orf8, VWFCP, vWF-CP, ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif 13
Analysenfrequenz
bei Anforderung
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
8h
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Citratplasma
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
2 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
Citrat (3.13% 0.106 mol/L Natriumcitrat) Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
nicht zutreffend
Spezielle Präanalytik - Probentransport
Falls die Probe zur Analyse nicht innerhalb von 2h im ZIMCL eintrifft, muss das Vollblut bei 10.000g für 15 Minuten zentrifugiert, das Citratplasma sofort tiefgekühlt und in gefrorenem Zustand versandt werden. Eine Langzeitlagerung (bis zu 1 Jahr) ist lediglich bei einer Temperatur von -70°C möglich.
Messbereich
Linearitätsbereich 1-125%
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
KEIN EDTA! (EDTA hemmt die ADAMTS13-Aktivität) ADAMTS13 Ergebnisse am Ceveron s100 werden nicht durch Hämoglobin bis zu 500 mg/dL, Bilirubin* bis zu 18 mg/dL, Lipämie bis zu 1400 mg/dL Intralipid™, Rheumafaktor bis zu 600 mg/dL und VWF bis zu 6 IU/mL beeinflusst. *Für den Fall, dass die Plasmaprobe eindeutig visuell ikterisch ist, so ist eine Probenvorverdünnung von 1:5 mit 0,9 % Kochsalzlösung empfohlen. Die Ergebnisse der verdünnten Probe müssen in diesem Fall mit dem Verdünnungsfaktor (x5) multipliziert werden.
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
Die analytische Spezifität wurde vom Hersteller für folgende Medikamente bestätigt (keine Interferenz >20%): Dabigatran, Rivaroxaban, Rifampicin, Phenylbutan, Ibuprofen, Cyclosporin, ASS, Rituximab, Prednisolon, Acetylcystein, Theophyllin, Metronidazol, Levodopa, Methyldopa, Doxycyclin HCL, Cefoxitin Na, Ampicillin Na, Acetaminophen, Caplacizumab
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
IVD-CE
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