Beschreibung*
Bestimmung von Vitamin B6 (Pyridoxal-P) aus EDTA Vollblut mittels HPLC-FLD
Ziel und Zweck der Untersuchung
Unter der Bezeichnung Vitamin B6 werden drei in der Natur vorkommende Pyridinderivate – Pyridoxin, Pyridoxamin und Pyridoxal – sowie deren 5´-Phosphatester - Pyridoxin-5´-phosphat, Pyridoxamin-5´-phosphat und Pyridoxal-5´-phosphat (PLP) - zusammengefasst. Die aktive Coenzymform ist das Pyridoxal-5´-phosphat (PLP), das die Hauptkomponente der oben angeführten Varianten im Blut darstellt. Pyridoxal-5´-Phosphat ist Cofaktor bei einer Vielzahl von enzymatischen Reaktionen im Stoffwechsel, insbesondere bei der Bildung von Serotonin im Gehirn und von Nicotinamid aus Tryptophan. Wegen seiner großen Bedeutung für den Aminosäurestoffwechsel führt ein Vitamin B6 Mangel zu einer erhöhten Ausscheidung von Aminosäuremetaboliten. Vitamin B6 Mangelsymptome sind u.a. Hautveränderungen wie Schuppung, Hyperpigmentierung, sowie Depressionen und Reizbarkeit. Durch die direkte Beteiligung von Vitamin B6 am Umbau der stark toxischen Aminosäure Homocystein zu Cystein, bedingt ein B6-Mangel eine Konzentrationserhöhung des Homocysteins und damit eine Erhöhung des Arterioskleroserisikos. Weiterhin ist die enterale Resorption von Eisen eingeschränkt.
Prinzip des Verfahrens
Probenvorbereitung: Fällung mit anschließender Derivatisierung HPLC Trennung mit FL-Detektion (Start: EX: 320nm, EM: 415nm; nach 3,8 min EX: 367nm, EM: 435nm)
Literatur
Labor und Diagnose (2008): Hrsg. Lothar Thomas, 7. Aufl., TH-Books Vitamine, Spurenelemente und Mineralstoffe (2002): Hrsg. Biesalski, Thieme Verlag
Ergebniseinheit
µg/l
Einheiten(sonstige)
keine
Synonyme
PLP
Analysenfrequenz
2x wöchentlich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
1 Woche, sofern ein 2. Aliquot eingefroren wurde.
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
(EDTA-) Vollblut
Sammelperiode
keine
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
2,7 ml EDTA -Vollblut
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
keine
Spezielle Präanalytik - Probentransport
Intern: Rohrpost (ungekühlt, lichtgeschützt) Extern: Der Zuweiser sollte EDTA-Vollblut unmittelbar nach der Blutentnahme 2x zu je 800µl aliquotieren (Lichtschutz!) und bei -20°C einfrieren. Die eingefrorenen Aliquote müssen gekühlt versendet werden.
Messbereich
4,5 – 500 µg/l
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Isoniazid, ein bakterizides Antibiotikum, interferiert mit Vitamin B6 (PLP) und führt zu einer falsch niedrigen Bestimmung von Vitamin B6 (PLP). Pyridoxin wird als Vitamin B6-Vitamer üblicherweise in Comedikation zu Isoniazid verabreicht. Auch höchste zu erwartende endogene Gehalte dieser Substanz beeinflussen das quantitative Ergebnis nicht nennenswert, aber Pyridoxin kann durch enzymatische Reaktionen in Vitamin B6 (PLP) umgewandelt werden. Es ist daher keine analytische, sondern eine pharmakokinetische Interferenz.
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
nicht zutreffend
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
CE Zertifikat der Firma Chromsystems (München)
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