Beschreibung*
Bestimmung von Vitamin K1 (Phyllochinon) aus EDTA Plasma mittels HPLC-FLD
Ziel und Zweck der Untersuchung
Neben den in der Natur vorkommenden Vitaminen K1 (Phyllochinon) und K2 (Menachinon) gibt es noch andere Chinone mit Vitamin-K-Wirkung. Pharmakologisch von Bedeutung sind jedoch nur die fettlöslichen Vitamine K1 und K2. Vitamin K wird rasch metabolisiert und ist nur in geringer Menge im Organismus gespeichert. Mangelerscheinungen sind Folgen einer verminderten Wirkung des Vitamins als Cofaktor einer mikrosomalen, Sauerstoff-abhängigen Carboxylase bei der Carboxylierung von spezifischen Glutaminsäureresten der Gerinnungsfaktoren, sowie des Osteocalcins. Die dadurch verminderte Bildung von γ-Carboxyglutaminsäure-Resten, die den Gerinnungsfaktoren die Fähigkeit verleihen, mit Ca2+ und Membranphospholipiden Komplexe zu bilden, aus denen dann nach proteolytischer Spaltung die aktiven Gerinnungsfaktoren freigesetzt werden, führt letztlich zu schweren Gerinnungsstörungen.
Prinzip des Verfahrens
In einem Fällungsschritt erfolgt die Abtrennung höher molekularer Substanzen aus den Proben. Anschließend wird Vit K1 aus dem Überstand extrahiert. Nach der Extraktion wird die organische obere Phase abgehoben und verdampft. Die Probe wird im Laufmittel aufgenommen, zentrifugiert und in das HPLC System injiziert. In einem hinter der analytischen Trennsäule angeschlossenen Reduktionsreaktor wird die Probe reduziert und kann im FL-Detektor nachgewiesen werden (EX: 248 nm; EM: 418 nm).
Literatur
Wang L.Y., Bates C.J, Yan L., Harrington D.J., Shearer M.J., Prentice A. (2004). Determination of phylloquinone (vitamin K1) in plasma and serum by HPLC with fluorescence detection, Clin. Chim. Acta, 347, 199-207 Saupe J. (1992). Vitamin K und Indikation zur Bestimmung im Plasma. Klin Lab 38, 51-54. Szulc P., Arlot M., Chapuy M.C., Duboef F., Meunier P.J., Delmas P.D.(1994). Serum undercarboxylated osteocalcin correlates with hip bone mineral desity in elderly women. J Bone Miner Res 9, 1591-95. Hodges S.J., Akesson K., Vergnaud P., Obrant K., Delmas P.D.(1993). Circulating levels of vitamin K1 and K2 decreased in elderly women with hip fractur. J Bone Miner Res 8, 1241-45.
Ergebniseinheit
ng/l
Einheiten(sonstige)
keine
Synonyme
Phyllochinon
Analysenfrequenz
wöchentlich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
7 Tage
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
EDTA-Plasma
Sammelperiode
keine
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
2 x 1,4 ml EDTA Vollblut
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
keine
Spezielle Präanalytik - Probentransport
Probengewinnung: Patient nüchtern (Vit K1 korreliert mit der Triglyceridkonzentration, s. verlinkte Literatur) Intern: Rohrpost (gekühlt + Lichtschutz) Extern: Der Zuweiser sollte das EDTA-Vollblut unmittelbar nach der Blutentnahme zentrifugieren, das daraus gewonnene EDTA-Plasma 2 Mal zu je 650 µl aliquotieren (Lichtschutz!) und anschließend bei -20°C einfrieren. Die eingefrorenen Aliquote müssen gefroren versendet werden.
Messbereich
180 - 25000 ng/l
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Starke Hämolyse und Lipämie
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
nicht zutreffend
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
siehe Konformitätserklärung in der Arbeitsvorschrift des Herstellers vom 03.12.2019
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