Beschreibung*
Nachweis von Hepatitis E Virus RNA in Serum mittels RT-PCR
Ziel und Zweck der Untersuchung
Die qualitative RT-PCR eignet sich für die Diagnose einer akuten oder chronischen HEV Infektion. Auf Grund der relativ großen Unsicherheit von serologischen Methoden und wegen des früheren Auftretens im zeitlichen Verlauf stellt der Nachweis von Hepatitis E RNA mehr als nur eine Ergänzung der serologischen Verfahren dar. Dieser Zeitvorteil ist insbesondere bei Patienten mit erhöhtem Risiko für eine fulminante Verlaufsform bedeutend und ist dadurch bedingt, dass die Serokonversion begleitend zur Symptomatik auftritt, während der direkte Erregernachweis schon bis zu zwei Wochen vorher mittels HEV PCR möglich ist. Bei in der Folge von Organtransplantationen immunsupprimierten Patienten besteht bei bis zu 60% die Gefahr eines chronischen Verlaufs der Erkrankung, welcher eine Leberzirrhose zur Folge haben kann. Insbesondere bei immunkompromittierten Patienten (angeborene und erworbene Immunschwächen, therapeutische Immunmodulation) wird der HEV-RNA Nachweis zur Diagnosestellung empfohlen, da dieses Patientenkollektiv häufig keine nachweisbaren Antikörper gegen das Virus bilden kann.
Prinzip des Verfahrens
Zunächst erfolgt eine reverse Transkription der Hepatitis E RNA in cDNA unter Verwendung Sequenz-spezifischer Primer. Der spezifische HEV Nachweis erfolgt mittels einer grün fluoreszenzmarkierten Sonde (FAM), welche spezifisch für den Open Reading Frame 3 von Hepatitis E aller vier Genotypen ist. Als interne Kontrolle dient ein zugesetztes RNA-Fragment, dessen korrekte reverse Transkription und Amplifikation mittels einer gelb (HEX) markierten Sonde überprüft wird. Um eine fehlerhafte Extraktion ausschließen zu können und die Extraktionseffizienz zu überwachen, werden im ZIMCL Lyse- und Extraktionsschritt durch Zusatz einer zusätzlichen Kontrolle zur Patientenprobe überwacht, welche mit Hilfe einer grünen Sonde (FAM) in einem separaten Ansatz detektiert wird. Eine weitere Differenzierung zwischen den Hepatitis E Subtypen ist mit der eingesetzten Methode nicht möglich.
Literatur
- Kamar et al. Hepatitis E virus and chronic Hepatitis in organ-transplant recipients. N Engl J Med 2008; 358:811-817. - Aggarwal et al. Hepatitis E. Hepatology 2011; 54:2218-2226. - Kumar et al. Hepatitis E in pregnancy. Int J Gynecol Obstet 2004; 85:240–244. - Schielke et al. Thermal stability of hepatitis E virus assessed by a molecular biological approach. Virology Journal 2011, 8:487.
Ergebniseinheit
Einheiten(sonstige)
HEV-RNA nachweisbar / nicht nachweisbar
Synonyme
HEV-PCR Hepatitis E Virus PCR HEV-Virus HEV
Analysenfrequenz
wöchentlich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
nicht zutreffend
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Serum
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
4,5 ml Vollblut
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
Serum Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
keine
Spezielle Präanalytik - Probentransport
Probenanlieferung bei 2-8°C, nicht frieren, nicht aliquotieren. Keine Annahme von Sekundärröhrchen!
Messbereich
nicht zutreffend (qualitative Analyse)
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
- Unzureichende Qualität und/oder Quantität des Probenmaterials - Heparin als Antikoagulans - stark lipämische Proben führen zu einer verminderten Extraktionseffizienz
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
nicht zutreffend
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
CE-IVD Assay
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