Parameterdetails

Parametername: Cytochrom P450 Isoenzym 3A4 Genotypisierung

Version: 1 Gültig ab 04.10.2019

Beschreibung* Genotypisierung von Cytochrom P450 Isoenzym 3A4 *1B/*22 aus Vollblut mittels PCR/RFLP und TaqMan Real-time PCR.

Ziel und Zweck der Untersuchung Ziel und Zweck der Untersuchung ist es genetische Dispositionen vorzeit zu erkennen. Sollten die beschriebenen Allele (C3A4*22/*1B) vorliegen (genetische Veranlagun), ist grundsätzlich die Aktivität des betroffenen Enzyms in Frage zu stellen. Sie kann sowohl erhöht (extensive Metabolizer) als auch erniedrigt(poor Metabolizer) sein. Bis auf Weiteres wird eine Empfehlung der Dosis-Anpassung nur für das Substrat Tacrolimus erteilt. Weitere Subsrate sind Gegenstand der Forschung und können ergänzt werden.

Prinzip des Verfahrens *1B (RFLP)
In einem ersten Schritt erfolgt die Isolierung genomischer DNA aus dem Untersuchungsmaterial. Nach Amplifikation der Nukleinsäure in drei verschiedenen PCR-Reaktionen erfolgt ein Verdau mit spezifischen Restriktionsendonukleasen. Die Genotypisierung erfolgt nach dem Prinzip der Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus-(RFLP)Analyse in einem Kapillarelektrophoresesystem.

*22 (RT-PCR, allelische Diskrimminierung)

Die Genotypisierung erfolgt nach dem Prinzip der allelischen Diskriminierung mittels Realtime PCR.
Es erfolgt eine PCR mit einem spezifischen Primer-Paar sowie unterschiedlich markierter Sonden für den Wildtyp und das mutierte Allel. Die Sequenzen der beiden Sonden unterscheiden sich exakt in dem Nucleotid das den SNP charakterisiert. Es werden sogenannte Hydrolyse-Sonden verwendet. Ein Oligonucleotid mit einem Reporter und einem Quencher lagert sich dabei sequenzspezifisch an den Einzelstrang an. Sobald die Polymerase ihre Aktivität aufnimmt, wird der Quencher von der Sonde entfernt und die Reporterfluoreszenz freigesetzt.

Literatur • van Schaik et al. “CYP3A5 variant allele frequencies in Dutch Caucasians.” Clin Chem. 2002 Oct;48(10):1668-71.
• H de jonge “In Vivo CYP3A4 Activity, CYP3A5 Genotype, and Hematocrit Predict Tracolimus Dose Requirements and Clearance in Renal Transplant Patients” Clinical Pharmacology & Therapeutiks, advance online publication 08/2012 doi:10.1038/clpt.2012.109
• D. Hesselink et al. “Genetic Polymorphism of the CYP3A4 / A5 / MDR-1 genes and pharmakokinetics oft he calcineurin inhibitor cyclosporin and tacrolimus“ Clinical Pharmacology & Therapeutiks, 2003, 0009-9236
• J. Ekbal et al. „Pharmacogenetics of immunosuppressive drugs: prospect of individual therapy for transplant patients.” Pharmacogenomics (2008), 9(5), 585-596
[2] L. ElensM R. R. Bouamar et al.; “A New Functional CYP3A4 Intron 6 Polymorphiosm Significantly Affects Tacrolimus Pharmacokinetics in Kidney Transplant Recipients” Clinical Chemistry 57:11, 1574-1583 (2011)

Ergebniseinheit

Einheiten(sonstige) qualitative Analyse

Synonyme Arzneimittelnebenwirkung
CYP3A4 Genotypisierung
Pharmakogenetik
Tacrolimus
Sirolimus
Cyclosporin

Analysenfrequenz 1x wöchentlich

Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage) 72 Stunden

Spezimen
(Plasma, Serum, Harn) EDTA-Vollblut

Sammelperiode nicht zutreffend

Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation) 1 ml

Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe K-EDTA Monovette

Spezielle Präanalytik - Probentransport Für die CYP3A4-Genotypisierung ist derzeit keine Einverständniserklärung erforderlich.
Probenanlieferung bei 2-8°C, nicht frieren, nicht aliquotieren. Keine Annahme von Sekundärröhrchen! Laut Beschluss der österreichischen Genttechnikkommission vom 4.12.2009 gilt für pharmakogenetische Untersuchungen folgende Regelung: Sollte ein im Zuge einer pharmakogenetischen Untersuchung analysierter Polymorphismus auch Aussagen i.S.d. §65 Abs.1 Z3 und 4 GTG über die Veranlagung für eine möglicherweise künftig ausbrechende genetisch bedingte Erkrankung zulassen, so ist die Untersuchung dieses Polymorphismus antragspflichtig i.S.d. §68 Abs.2 GTG.

Messbereich *1/*1, *1/*1B, *1B/*1B, *1/*22, *22/*22

Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie) • Heparin als Antikoagulans
• Unzureichende Qualität und/oder Quantität des Probenmaterials

Ausdruck gültig am 20.07.2019

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