Beschreibung*
Nachweis der BCL2/JH (t(14;18)(q32;q21)) Translokation aus isolierten mononukleären Zellen (Vollblut, Knochenmarkaspirat) mittels Endpunkt-PCR.
Ziel und Zweck der Untersuchung
Die Translokation t(14;18)(q32;q21) mit dem entstehenden Fusionsgen BCL2/JH ist charakteristisch für follikuläre Lymphome, bei denen sie in 80% der Fälle mittels PCR nachgewiesen werden kann. Daneben tritt sie in ca. 20% der großzellig diffusen Lymphome (DLBCL) auf. Durch die Fusion des BCL2 Gens mit der Enhancer-Sequenz des IGH Gens kommt es zu einer Überexpression von BCL2 und damit zu einer Hemmung der Apoptose. Der Nachweis der BCL2/JH-Translokation dient zur Diagnose von follikulären Lymphomen, zur Abgrenzung anderer B-Zell Neoplasien von follikulären Lymphomen sowie zur Verlaufskontrolle unter Therapie.
Prinzip des Verfahrens
Für den Nachweis von Translokationen werden routinemäßig PCR-Techniken verwendet. Beim im ZIMCL verwendeten Assay werden in drei unterschiedlichen Ansätzen mit verschiedenen translokationsspezifischen Primern, die den internationalen Empfehlungen (Kollaborations-Gruppe BIOMED-2; Van Dongen. Leukemia. 2003) entsprechen, Translokationen in der „Major Breakpoint Region“ und der „Minor Cluster Region“ erfasst. Manche Bruchstellen können weit auseinander liegende Loci betreffen, welche mit der verwendeten Methode nicht erfasst werden. Daher kann ein negatives Testergebnis ein BCL2/IGH Rearrangement nicht mit vollständiger Sicherheit ausschließen. Zur Überprüfung der Qualität und Quantität der eingesetzten DNA werden bei jedem Ansatz verschiedene Kontrollgenabschnitte mitamplifiziert. Die Detektion der PCR-Produkte erfolgt mittels Gelelektrophorese.
Literatur
- Van Dongen et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia. 2003 Dec;17(12):2257-317 - Nadel et al. Novel Insights into the Mechanism of t( 14;18)(q32;q21) Translocation in Follicular Lymphoma. Leukemia and Lymphoma. 2001;(4),1181-1194. - Jacobson et al. Early stage follicular lymphoma, current management and controversies. Curr Opin Oncol. 2012 Sep;24(5):475-9. - Kridel et al. Pathogenesis of follicular lymphoma. J Clin Invest. 2012;122(10):3424–3431.
Ergebniseinheit
Einheiten(sonstige)
qualitative Analyse
Synonyme
BCL2 BCL2/JH IGH/BCL2 BCL2/IGH t(14;18)(q32;q21) t(14;18)
Analysenfrequenz
bei Bedarf
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
24 h
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
EDTA-Vollblut, Knochenmark
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
3 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Spezielle Präanalytik - Probentransport
INTERN: EDTA Blut bzw. Knochenmarkaspirat SOFORT NACH GEWINNUNG mittels ROHRPOST INS ZIMCL einsenden EXTERN: EDTA Blut bzw. Knochenmarkaspirat SOFORT NACH GEWINNUNG kühlen (2-8°C) und mit COOLPACKS innerhalb von 24h ins ZIMCL versenden. EDTA-Vollblut bzw. Knochenmarkaspirat NIEMALS FRIEREN und auch KEINESFALLS auf Gefrierelemente legen!
Messbereich
BCL2/JH: nachweisbar / nicht nachweisbar
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
•Heparin als Antikoagulans kann die PCR stören •Unzureichende Qualität und/oder Quantität des Probenmaterials
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
keine
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
in-house validierter RUO-Assay
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