Beschreibung*
Immunologischer In-vitro-Test zur quantitativen Bestimmung von aktivem Vitamin B12 (Holotranscobalamin) in Humanserum. Dieser Test dient als Hilfsmittel bei der Diagnose und der Behandlung eines Vitamin-B12-Mangels. Der ElektroChemiLumineszenz ImmunoAssay “ECLIA“ ist zur Durchführung an Elecsys und cobas e Immunoassay-Systemen vorgesehen.
Ziel und Zweck der Untersuchung
Vitamin B12 ist ein essenzieller, wasserlöslicher Mikronährstoff, der nicht im menschlichen Körper synthetisiert werden kann. Am Transport und an der Resorption von Vitamin B12 (Cobalamin) sind drei Transportproteine beteiligt: der „Intrinsic Factor“, Transcobalamin (TC) und Haptocorrin (HC). Der Hauptanteil (70‑90 %) von im Blut zirkulierendem Gesamtserum-Vitamin B12 ist an HC gebunden. Ungefähr 20‑30 % des gesamten zirkulierenden Vitamins B12 ist an TC gebunden (und wird auch als HoloTC bezeichnet). Die zelluläre Aufnahme aus dem zirkulierenden Blut verlangt den biologisch aktiven HoloTC-Komplex. Nur in dieser Form kann Vitamin B12 in die Zelle eindringen und dort seine biologische Wirkung entfalten. Aus diesem Grund wird es auch als „aktives Vitamin B12“ bezeichnet. Vitamin B12 ist für den Kohlehydrat-,Fett- und Proteinstoffwechsel sowie für die Nukleinsäuresynthese essenziell. Es dient als Cofaktor für Enzyme, die für zwei wichtige Stoffwechselreaktionen entscheidend sind: die Synthese von Methionin aus Homocystein und die Synthese von Succinyl‑Coenzym A aus Methylmalonyl-Coenzym A. Somit ist Vitamin B12 unverzichtbar für Prozesse, wie die Zellteilung, die Aufrechterhaltung der Funktion des zentralen Nervensystems und die Bildung und Regenerierung von roten Blutzellen. Ein nicht behandelter Vitamin-B12-Mangel kann erhebliche klinische Folgen haben und irreversible Schädigungen verursachen. Die häufigsten Manifestationen eines Vitamin-B12-Mangels sind hämatologische Störungen, insbesondere bei der Bildung von Erythrozyten (z.B. megaloblastische Anämie), sowie neurologische Störungen, wie die Demyelinisation des Rückenmarks und kognitive Defizite. Ein Vitamin-B12-Mangel wird auch mit Störungen der Knochenfunktion und optischer Neuropathie in Verbindung gebracht, diese sind allerdings seltener.Die Hauptursachen eines Vitamin-B12-Mangels sind Malabsorption aufgrund einer perniziösen Anämie (Autoimmungastritis) oder aufgrund von Alter, unzureichender Aufnahme über die Nahrung und anderer erworbener Defizite des Vitamin-B12-Stoffwechsels.Angesichts der Tatsache, dass HoloTC die aktive Fraktion von Vitamin B12 ist und eine kürzere Halbwertszeit im Kreislauf hat als HoloHC, wird in einer Reihe von Veröffentlichungen die Bestimmung von HoloTC als diagnostisch genauerer und klinisch relevanterer Indikator für einen Vitamin-B12-Mangel genannt als Gesamtserum-Vitamin-B12. Außerdem ist HoloTC im Gegensatz zu Gesamtserum-Vitamin-B12 vermutlich während der Schwangerschaft stabil. Zudem hat sich HoloTC als leistungsstärkster Indikator des Vitamin-B12-Status bei älteren Menschen erwiesen, was aktives Vitamin B12 als Erstlinienbeurteilung für einen Vitamin-B12-Mangel nahelegt.
Prinzip des Verfahrens
Sandwichprinzip. Gesamtdauer des Tests: 18 Minuten. ▪ 1. Inkubation: 18 μl Probe, ein biotinylierter monoklonaler Anti‑Holotranscobalamin-Antikörper und ein mit Ruthenium-Komplex markierter monoklonaler Anti‑Transcobalamin-Antikörper bilden einen Sandwich-Komplex. ▪ 2. Inkubation: Nach Zugabe von Streptavidin-beschichteten Mikropartikeln wird der Komplex über Biotin-Streptavidin Wechselwirkung an die Festphase gebunden. ▪ Das Reaktionsgemisch wird in die Messzelle überführt, wo die Mikropartikel durch magnetische Wirkung auf die Oberfläche der Elektrode fixiert werden. Danach werden die ungebundenen Substanzen mit ProCell/ProCell M entfernt. Durch Anlegen einer Spannung wird die Chemilumineszenzemission induziert und mit dem Photomultiplier gemessen. ▪ Die Ergebnisse werden anhand einer Kalibrationskurve ermittelt. Diese wird durch eine 2‑Punkt-Kalibration und eine über den Reagenzbarcode
Literatur
[1] Thomas L. Labor und Diagnose [2] Packungsbeilage
Ergebniseinheit
pmol/l
Einheiten(sonstige)
keine
Synonyme
Aktives Vitamin B12, HoloTC, HTC
Analysenfrequenz
werktags; Samstag, Sonntag, Feiertag vormittags;
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
7 Tage
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Serum
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
1 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
Serum Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
keine
Spezielle Präanalytik - Probentransport
- Venenpunktion, - Nur wenn HoloTC und Vitamin B12 gemeinsam angefordert sind und Vitamin B12 <400 pmol/l ist, wird HoloTC bestimmt. - Die HoloTC-Konzentrationen reflektieren den Vitamin B12-Status, unabhängig von einer kürzlich erfolgten Aufnahme des Vitamins. INTERN: - Transport über Rohrpost EXTERN: Haltbarkeit: 5Tage bei 15‑25°C,14 Tage bei 2‑8°C, 6 Monate bei ‑20°C(± 5 °C). 5-maliges Einfrieren ist möglich Die Proben können bis 16 Std. bei Raumtemperatur,abgesert bis zu 3d bei 2 - 8 °C und darüber hinaus bei -20°C versandt werden.
Messbereich
5,0 - 150,0 pmol/l
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
s. verlinktes Dokument
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
16 häufig verwendete Pharmaka wurden in vitro getestet. Es konnten keine Störungen des Tests festgestellt werden.
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
ISO 15223‑1
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