Parameterdetails

Parametername: Calretikulin, Exon 9 Mutationsnachweis

Version: 1 Gültig ab 06.03.2025

Beschreibung* Nachweis von Mutationen im Exon 9 des Calretikulin-Gens in isolierten Leukozyten aus Vollblut und Knochenmarkaspirat mittels PCR, Kapillarelektrophorese und DNA-Sequenzierung

Ziel und Zweck der Untersuchung Myeloproliferative Neoplasien (MPN) sind klonale maligne Erkrankungen der Hämatopoese, welche durch verschiedene molekulare Veränderungen charakterisiert sind. Diese Marker treten praktisch nie gemeinsam auf und umfassten bislang:

-BCR-ABL1: ein Fusionsgen, das durch die Chromosomentranslokation t(9;22) entsteht.
-JAK2 Mutationen: eine Punktmutation in der JAK2-Tyrosinkinase (V617F) sowie im Exon12 des JAK2 Gens.
-MPL Mutationen: Punktmutationen des Thrombopoietinrezeptors (W515L, W515K).

Der Nachweis von BCR-ABL1 ist diagnostisch beweisend für die chronische myeloische Leukämie (CML) während die JAK2 V617F Mutation bei verschiedenen MPN mit unterschiedlichen Frequenzen zu finden ist (Polyzythämia vera (PV):>90%, Essentielle Thrombozythämie (ET): ca. 50%, Primäre Myelofibrose (PMF, OMF): ca. 50%). MPL-Mutationen finden sich bei ET und PMF in ca. 5 % der Fälle.

Bis vor Kurzem war unklar, welche klonalen genetischen Veränderungen in den knapp 50 % von ET- und PMF-Fällen vorliegen, bei denen keine JAK2 V617F-Mutation nachweisbar ist.
In zwei Publikationen, die im Dezember 2013 im New England Journal of Medicine erschienen sind (Klampfl et al., NEJM, 2013; Nangalia et al., NEJM, 2013), wurde gezeigt, dass in der Mehrheit dieser Fälle Mutationen im neunten Exon des Calreticulin-Gens (CALR) vorliegen. Calreticulin ist ein Protein, das eine wichtige Rolle beim Protein-trafficking zwischen Zell-Kompartimenten spielt. Auf welche Weise die CALR-Exon 9–Mutationen pathogenetisch letztlich zur Entwicklung eines MPN führen ist bisher noch nicht geklärt.

Bei gegenwärtigem Wissensstand ist somit bei Verdacht auf das Vorliegen einer MPN aus labordiagnostischer Sicht folgende stufendiagnostische Nachweisreihenfolge zu empfehlen:

1. BCR-ABL1
2. BCR-ABL1 negativ, dann JAK2 V617F
(falls eine isolierte Erythrozytose
vorliegt, auch die JAK2 Exon 12-Mutationen)
3. BCR-ABL1 und JAK2 V617F negativ,
dann CALR Exon 9-Mutationen
4. BCR-ABL1, JAK2 V617F und CALR negativ,
dann MPL-Mutationen

Prinzip des Verfahrens PCR-Amplifikation von isolierter genomischer DNA und Fragmentlängenbestimmung mittels fluoreszenzbasierter GeneScan-Analyse. Bei positivem Mutationsnachweis erfolgt die Identifizierung der zu Grunde liegenden Frameshift-Mutation mittels direkter DNA-Sequenzierung. Ebenso erfolgt bei erstmaliger Anforderung eines Calreticulin-Mutations-nachweises auch eine Sequenzierung des PCR-Produktes, um minimale (<3bp) Insertionen bzw. Deletionen zu erfassen.

Literatur siehe oben

Ergebniseinheit

Einheiten(sonstige) qualitative Analyse (Insertion bzw. Deletion nachgewiesen/nicht nachgewiesen)

Synonyme CALR
Calreticulin

Analysenfrequenz nach Anforderung

Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage) 24h

Spezimen
(Plasma, Serum, Harn) EDTA-Vollblut, Knochenmarkaspirat; Sondermaterialien (z.B. FFPE) nur nach Rücksprache

Sammelperiode nicht zutreffend

Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation) zumindest 5ml EDTA-Blut bzw. 3-5ml Knochenmark zur Leukozytenisolierung

Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe K-EDTA Monovette

Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige) Heparinisierte Spritze für Knochenmarkaspirat

Spezielle Präanalytik - Probentransport INTERN:
EDTA Blut bzw. Knochenmarkaspirat SOFORT NACH GEWINNUNG mittels ROHRPOST INS ZIMCL einsenden

EXTERN:
EDTA Blut bzw. Knochenmarkaspirat SOFORT NACH GEWINNUNG kühlen (2-8°C) und mit COOLPACKS innerhalb von 24h ins ZIMCL versenden.

EDTA-Vollblut bzw. Knochenmarkaspirat NIEMALS FRIEREN und auch KEINESFALLS auf Gefrierelemente legen!

Messbereich nicht zutreffend (qualitative Analyse)

Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie) - Unzureichende DNA-Ausbeute (zu geringe Zellzahl im Primärmaterial, Primärmaterial geronnen)
- Unzureichende DNA-Qualität (Degradierung, inadäquate Präanalytik)
- Heparinkontamination der Probe

Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch) nicht zutreffend

Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR in-house Methode

Erklärung nach IVDR 2017/746
(für in-house Methoden) ERKLÄRUNG nach Art. 5 (5) der EU-Verordnung über In-vitro-Diagnostika (EU) 2017/746 (IVDR) zur Eigenherstellung eines IVD in Gesundheitseinrichtungen:

Wir erklären in alleiniger Verantwortung, dass das unten angeführte Produkt, welches im Wege der Eigenherstellung von uns hergestellt wird, allen Anforderungen der IVD-Verordnung (EU) 2017/746, Anhang I Grundlegende Sicherheits- und Leistungsanforderungen, entspricht, die anwendbar sind:

Das Produkt wurde in unseren eigenen Räumlichkeiten von uns in nicht industriellem Maßstab gefertigt und wird ausschließlich in unserer Gesundheitseinrichtung betrieben.

Gesundheitseinrichtung: Tirol Kliniken, Anichstr. 35, 6020 Innsbruck
Geschäftsführer: Mag. Stefan Deflorian
Leiter Qualitätsmanagement: Martin Weichselbraun, MSc.

Produktname: Calretikulin Exon 9 Mutationsnachweis

Ort und Datum der Erstellung: Innsbruck, am: 15.07.2014

Produktklassifizierung nach Anhang VIII: Klasse: C

Ausdruck gültig am 28.03.2025

Für die zur Verfügung gestellten Informationen kann keinerlei Gewähr im Hinblick auf Aktualität, Korrektheit, Vollständigkeit oder Qualität übernommen werden. Haftungsansprüche, welche sich auf Schäden materieller oder ideeller Art beziehen, die durch die Nutzung oder Nichtnutzung der dargebotenen Informationen bzw. durch die Nutzung fehlerhafter und unvollständiger Informationen verursacht wurden, sind ausgeschlossen. Die Verwendung und Nutzung der Zusammenstellungen liegt daher alleine im Verantwortungsbereich des Anwenders/der Anwenderin, welche(r) das ZIMCL/tirol kliniken gegenüber Ansprüchen Dritter schad- und klaglos halten wird.