Beschreibung*
Immunphänotypisierung von Zellen des peripheren Blutes, Knochenmarks, Liquors oder von Punktaten mittels Durchflusszytometrie
Ziel und Zweck der Untersuchung
Qualitative und quantitative Analyse der Lymphozytensubpopulationen im peripheren Blut. Die Analyse umfasst folgende Parameter: Leukozyten; Lymphozyten; B-Zellen (CD19+); T-Zellen (CD3+); NK-Zellen (CD3-/CD56+); T-Helferzellen (CD3+CD4+); T-Suppressorzellen / Zytotoxische T-Zellen (CD3+CD8+); CD4/CD8-Ratio; doppelt positive T-Zellen (CD3+CD4+CD8+); doppelt negative T-Zellen (CD3+CD4-CD8-); NKT- (Zytotoxische) Zellen (CD3+/56+); aktivierte T-Zellen (CD3+HLADR+). Indikationen: Diagnostik und Verlaufskontrolle angeborener und erworbener Immundefizienzen; Screening auf lymphoproliferative Prozesse
Prinzip des Verfahrens
Analyse von Einzelzellen in Suspension auf Grundlage von Streulicht- und Fluoreszenzeigenschaften. Antigene (sogenannte CD-Marker = cluster of differentiation) an der Zelloberfläche und im Zellinneren werden durch fluoreszierende Antikörper markiert, durch einen Hüllstrom (Sheath Flüssigkeit) fokussiert und als Einzelzellen an einer Lichtquelle (Laser) vorbeigeführt. Die dadurch emittierten Lichtsignale werden mit Hilfe verschiedener Photomultiplier (PMTs) in elektronische Signale umgewandelt und als Messdaten gespeichert. Zusätzlich wird die Streuung des Anregungslichtes als Forward Scatter (FSC; entspricht der Größe der Zelle) und Side Scatter (SSC; entspricht in etwa der Granularität und Struktur der Zelle) gemessen. An den im ZIMCL eingesetzten Flowzytometern können durch drei verschieden Laser (488nm (blau), 633nm (rot), 405nm (violett)) acht verschiedene Fluorochrome angeregt werden. Durch die Analyse einer Vielzahl von Zellen können bei der anschließenden Auswertung der Daten verschiedene Zellpopulationen definiert werden. Aus Vollblut, Knochenmarkaspiraten und Punktaten werden Leukozytensubpopulationen relativ zu den Gesamtleukozyten quantifiziert. Im peripherem Blut werden die Leukozytensubpopulationen auch absolut quantifiziert (Dual platform Methode).
Literatur
Thomas L. Labor und Diagnose. 8. Auflage s. Anhang
Ergebniseinheit
%
Einheiten(sonstige)
Absolut-Resultate: Zellen/µl; Relativ-Resultate: % der jeweiligen Referenzpopulation (am Befund spezifiziert); CD4/CD8-Ratio, kappa/lamba Ratio, mittlere Fluoreszenzintensität gemäß Euroflow Kalibration (MFI): dimensionslos
Synonyme
FACS-Analyse; Immunologische Zelltypisierung; Immunphänotypisierung Immunstatus Lymphozytentypisierung
Analysenfrequenz
täglich, außer Wochenende
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
24 h
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Nativblut mit K-EDTA, Liquor oder Punktat
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
500 µl
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
Liquor, Punktat oder BAL (broncho-alveoläre Lavage) ohne Zusatz
Spezielle Präanalytik - Probentransport
- Für Analysen aus peripherem Blut: Venenpunktion oder kapilläre Abnahme; Transport über Rohrpost bzw. Postversand bei Raumtemperatur
Messbereich
Analyt- und Epitopspezifisch
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Normoblasten; Makroplättchen; Megakaryozyten; Lyse-resistente Erythrozyten;
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
unspezifische Bindung der Antikörper möglich, oft patientenspezifisch
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
Analyse-Gerät, Reagenzien und Antikörper CE-IVD-zertifiziert
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