Beschreibung*
Nachweis von SARS-CoV-2 RNA aus Atemwegs-Abstrichen in Flüssigtransport-Medium mittels isothermaler Amplifikation (NAT)
Ziel und Zweck der Untersuchung
Das SARS-CoV-2-Virus ist ein beta-Coronavirus (Untergruppe: Sarbecovirus) mit einzelsträngigem RNA-Genom. Das Virus verursacht die COVID-19-Erkrankung, welche seit Anfang 2020 weltweit pandemisch ist und zu einem schweren, intensivpflichtigen Atemwegssyndrom mit beträchtlicher Mortalität führen kann. Der direkte Erregernachweis von Virus-RNA sollte bei jedem definitionsgemäßen Verdachtsfall (die Definition „Verdachtsfall“ kann mit der Zeit variieren und beinhaltet klinische Kriterien und Kontakt-Kriterien) durchgeführt werden und erfolgt primär aus Atemwegs-Abstrichen. Ein positiver direkter Erregernachweis von SARS-CoV-2 aus Atemwegs-Abstrichen stützt die Diagnose einer akuten COVID-19-Erkrankung.
Prinzip des Verfahrens
Der Aptima-SARS-CoV-2-Test kombiniert die Technologien Target Capture, Transkription Mediierte Amplification (TMA) und Dual Kinetic Assay (DKA). RNA-Moleküle werden aus Proben unter Verwendung von Capture-Oligomeren mittels Target-Capturing, welche magnetische Mikropartikel enthalten, isoliert. Die Capture-Oligomere enthalten komplementäre Sequenzen zu zwei spezifischen Regionen der Virus-Zielmoleküle (Target 1: ORF1ab Region1 bzw. Target 2: ORF2ab Region2). Für jedes Target lagert sich während des Hybridisierungsschritts auf Raumtemperatur ein separates Capture-Oligomer an die Ziel-Sequenz. Anschließend erfolgt durch Bindung an Mikropartikel eine Separation durch einen Magneten sowie ein Waschritt. In weiterer Folge erfolgt die Amplifikation und Detektion mittels spezifischer chemilumineszierende Nukleinsäuresonden für jedes Zielamplikon und die interne Kontrolle (IC). Während des Detektionsschritt wird das von den markierten Hybriden emittierte Licht als Photonensignale in einem Luminometer erfasst und als Relative Light Units (RLU) angegeben. Durch Erfassung des kinetischen Licht-Profils der verschiedenen Sonden kann zwischen Target und IC differenziert werden. Während das IC-Signal eine sehr schnelle Kinetik ("Flasher") aufweist, ist die chemilumineszierende Nachweisreaktion für das SARS-CoV-2-Signal relativ langsam (kinetischer "glower" Typ). Die Testergebnisse werden schließlich durch einen Cut-off bestimmt, der auf der Gesamt-RLU und dem Typ der kinetischen Kurve beruht.
Literatur
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Ergebniseinheit
Einheiten(sonstige)
nicht zutreffend (qualitative Analyse)
Synonyme
SARS-CoV-2 NAT COVID-19 NAT Corona NAT Corona PCR Corona isothermale Amplifikation Covid isothermale Amplifikation Corona RNA
Analysenfrequenz
täglich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
nicht zutreffend (spezielles eigenes Abnahmesystem erforderlich)
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Atemwegs-Abstrich (tiefer Naso-/Oropharynx) in Flüssigtransport-Medium - ausschließlich UTM
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
1,5 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
Flüssigtransport-Medium (UTM) für Atemwegs-Abstriche
Spezielle Präanalytik - Probentransport
CAVE: KORREKTER ATEMWEGSABSTRICH ESSENTIELL! - Verunreinigung des Transportmediums durch Schleim, dadurch ggf. zu hohe Viskosität und Beeinträchtigung der Extraktion (-> invalides Ergebnis). Daher Schneuzen vor nasopharyngealem Abstrich unbedingt empfohlen. - Guanidin-hältige Transport-Medien führen zu einer Testinterferenz und können nicht verwendet werden - Transport ins Labor innerhalb von max. 24 Std. Bei längerer Transportdauer Probenantransport bei 2-8°C,nicht frieren, nicht aliquotieren. - Keine Annahme von Trockenabstrich-Tupfer.
Messbereich
nicht zutreffend (qualitative Analyse, Ergebnis SARS-CoV-2-RNA nachweisbar / nicht nachweisbar)
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
- Guanidin-hältige Medien führen zu einer Testinterferenz und können nicht verwendet werden - Verunreinigung des Transportmediums durch Schleim, dadurch ggf. zu hohe Viskosität und Beeinträchtigung der Extraktion. Daher Schneuzen vor Abstrich empfohlen. - Unzureichende Qualität und/oder Quantität des Probenmaterials Aufgrund der Viruseigenschaft (RNA-Virus) ist das Ausgangsprobenmaterial wahrscheinlich empfindlich gegen oftmaliges Auftauen und Einfrieren, weshalb eine Lagerung bei bei 2-8°C bis zur Testung erfolgen sollte und auch bei wiederholten Messungen mehrmalige Gefrierzyklen vermieden werden sollten.
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
Eine Kreuzreaktion mit anderen humanen Coronaviren inkl. SARS und MERS, sowie mit diversen anderen Viren wurde herstellerseitig ausgeschlossen; Details siehe Verifizierungsdokument und Manual
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
CE-IVD
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