Beschreibung*
Immunphänotypisierung von Blasten und anderen leukämischen Zellen des peripheren Blutes, Knochenmarks, Liquors oder von Punktaten mittels Durchflusszytometrie
Ziel und Zweck der Untersuchung
- Diagnose, Differentialdiagnose und Verlaufskontrolle hämatologischer Erkrankungen mit Blasten- oder Monozytenvermehung (z.B. akute Leukämien, MDS, MDS/MPN...). - Weitere Abklärung eines pathologischen Differentialblutbildes oder eines, im Knochenmark oder Punktat, erhobenen zytomorphologisch suspekten Befundes mit V.a. Blasten. Die Analyse erfolgt stufendiagnostisch mit oder nach der Lymphozyten-Basistypisierung. Zunächst wird ein Blastenscreen-Röhrchen angesetzt, um den Blastenanteil sowie die Linienzugehörigkeit (myeloisch oder lymphatisch) festzustellen. Bei Erstdiagnose einer akuten Leukämie erfolgt anschließend die weitere Leukämie-Klassifizierung mittels den jeweiligen linienspezifischen EuroFlow Panels. Es handelt sich dabei um die Subtypisierung der Blasten hinsichtlich der Expression von relevanten CD-Markern für eine exaktere Klassifizierung von Akuten Leukämien. Bei Verlaufskontrollen von Blastenvermehrungen wird das Blastenscreen-Röhrchen sowie ggf. weitere Röhrchen mit entsprechenden individuellen MRD-Markern angesetzt. Folgende CD-Marker werden zur qualitativen Analyse von Blastenvermehungen bestimmt: - Blastenscreen: CD34, CD117, CD33, CD19, CD10, CD38, HLADR, CD45 - Monozytentypisierung: CD34, CD117, HLADR, CD36, CD64, CD14, CD300e, CD45, ggf. CD16, CD4, CD56 - intrazelluläre Marker (ALOT, ggf. Monozytenmarker): CD34, CD19, cytMPO, cytCD79a, CD3, cytCD3, CD7, CD45. Bei V.a. monozytäre Blasten: cytLacto, cytLyso - AML/MDS (5-7 Röhrchen): CD34, CD117, HLADR, CD16, CD13, CD11b, CD10, CD35, CDCD64, CD200e, CD14, CD36, CD105, CD33, CD71, nuTdT, CD56, CD7, CD19, CD15, NG2, CD22, CD38, CD45. Bei V.a. megakaryopoetische Blasten, dendritische Zellen oder Mastzellen: CD42a, CD61, CD203c, CD123, CD4, CD41a, CD25, CD42b, CD9. Indikation: Klassifizierung von AMLs und Blastenvermehrung bei MDS - BCP-ALL (3 Röhrchen): CD19, CD34, CD58, CD66c, CD10, CD38, CD20, cytIgM, CD33, sIgM, Lambda, Kappa, nuTdT, CD13, CD22, CD24, CD9, CD45 Indikation: Klassifizierung von B-Vorläufer Leukämien - T-ALL (3 Röhrchen): sCD3, cytCD3, nuTdT, CD99, CD5, CD10, CD1a, CD2, CD117, CD4, CD8, CD7, TCR gamma/deta, TCR alpha/beta, CD56, CD123, CD45 Indikation: Klassifizierung von T-Vorläufer Leukämien Allgemeiner Hinweis: Die Entscheidung über Notwendigkeit und Art einer durchflusszytometrischen Analyse wird in Zusammenschau mit der Zuweisungsdiagnose, dem Differentialblutbild und der Zytomorphologie, ggf. nach Rücksprache mit dem Einsender, im Labor getroffen.
Prinzip des Verfahrens
Analyse von Einzelzellen in Suspension auf Grundlage von Streulicht- und Fluoreszenzeigenschaften. Antigene (sogenannte CD-Marker = cluster of differentiation) an der Zelloberfläche und im Zellinneren werden durch fluoreszierende Antikörper markiert, durch einen Hüllstrom (Sheath Flüssigkeit) fokussiert und als Einzelzellen an einer Lichtquelle (Laser) vorbeigeführt. Die dadurch emittierten Lichtsignale werden mit Hilfe verschiedener Photomultiplier (PMTs) in elektronische Signale umgewandelt und als Messdaten gespeichert. Zusätzlich wird die Streuung des Anregungslichtes als Forward Scatter (FSC; entspricht der Größe der Zelle) und Side Scatter (SSC; entspricht in etwa der Granularität und Struktur der Zelle) gemessen. An den im ZIMCL eingesetzten Flowzytometern können durch drei verschieden Laser (488nm (blau), 633nm (rot), 405nm (violett)) acht verschiedene Fluorochrome angeregt werden. Durch die Analyse einer Vielzahl von Zellen können bei der anschließenden Auswertung der Daten verschiedene Zellpopulationen definiert werden. Aus Vollblut, Knochenmarkaspiraten und Punktaten werden Leukozytensubpopulationen relativ zu den Gesamtleukozyten quantifiziert. Im peripherem Blut werden die Leukozytensubpopulationen auch absolut quantifiziert (Dual platform Methode).
Literatur
Thomas L. Labor und Diagnose. aktuelle Auflage Roland Fuchs et al.: Manual Hämatologie, Nora-Verlag, aktuelle Auflage WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues; aktuelle Auflage
Ergebniseinheit
%
Einheiten(sonstige)
Absolut-Resultate: Zellen/µl; Relativ-Resultate: % der leukämischen Population
Synonyme
FACS-Analyse; Immunologische Zelltypisierung; Immunphänotypisierung
Analysenfrequenz
täglich, außer Wochenende
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage)
24 h
Spezimen
(Plasma, Serum, Harn)
Nativblut mit K-EDTA, Knochenmark-Aspirat, Liquor oder Punktat
Sammelperiode
nicht zutreffend
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
500 µl
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige)
Knochenmark-Spritze mit Heparin, Liquor, Punktat oder BAL (broncho-alveoläre Lavage) ohne Zusatz
Spezielle Präanalytik - Probentransport
- Für Analysen aus peripherem Blut: Venenpunktion oder kapilläre Abnahme; Transport über Rohrpost bzw. Postversand bei Raumtemperatur - Für Analysen aus Knochenmark: Knochenmarkpunktion; Transport durch BMA bzw. Postversand bei Raumtemperatur
Messbereich
Analyt- und Epitopspezifisch
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Normoblasten; Makroplättchen; Megakaryozyten; Lyse-resistente Erythrozyten;
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
unspezifische Bindung der Antikörper möglich, oft patientenspezifisch
Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR
Analyse-Gerät, Reagenzien und Antikörper CE-IVD-zertifiziert
Für die zur Verfügung gestellten Informationen kann keinerlei Gewähr im Hinblick auf Aktualität, Korrektheit, Vollständigkeit oder Qualität übernommen werden. Haftungsansprüche, welche sich auf Schäden materieller oder ideeller Art beziehen, die durch die Nutzung oder Nichtnutzung der dargebotenen Informationen bzw. durch die Nutzung fehlerhafter und unvollständiger Informationen verursacht wurden, sind ausgeschlossen. Die Verwendung und Nutzung der Zusammenstellungen liegt daher alleine im Verantwortungsbereich des Anwenders/der Anwenderin, welche(r) das ZIMCL/tirol kliniken gegenüber Ansprüchen Dritter schad- und klaglos halten wird.