Parameterdetails

Parametername: Flowzytometrie, T-/NK-Zell Spezifizierung

Version: 2 Gültig ab 23.10.2024

Beschreibung* Immunphänotypisierung von Zellen des peripheren Blutes, Knochenmarks, Liquors oder von Punktaten mittels Durchflusszytometrie

Ziel und Zweck der Untersuchung - Diagnose, Differentialdiagnose und Verlaufskontrolle hämatologischer Erkrankungen (z.B. leukämische oder lymphoproliferative Erkrankungen)
- Stufendiagnostische Abklärung eines pathologischen Differentialblutbildes oder eines, im Knochenmark oder Punktat erhobenen zytomorphologisch suspekten Befundes.

Die Analyse mittels Euroflow CLPD Panels folgt stufendiagnostisch der Lymphozyten-Basistypisierung +/- Leichtketten-Analyse.

Fällt bei der Lymphozytenbasisuntersuchung eine auffällige T- oder NK-Zellpopulation auf oder bei entsprechender Fragestellung folgt im zweiten Schritt die T-Zellabklärung bzw. TNHL-Spezifizierung mittels weiterer nach Euroflow adaptierten T/NK-CLPD Panels. Es handelt sich dabei um eine Klonalitätsabklärung und Subtypisierung auffälliger/klonaler T/NK-Zellen hinsichtlich der Expression von relevanten CD-Markern für die weitere Klassifizierung von T-Zell-Lymphomen.
Folgende CD-Marker werden zur qualitativen Analyse von auffälligen T/NK-Zellpopulationen bestimmt:

- T_CLPD Screen (T1): CD7, HLADR, CD3, CD2, CD5, CD8, CD4, CD45.

- T/NK_CLPD Screen (T2): CD57, CD30, CD3, CD56, CD28, CD8, CD4, CD45.

- T_CLPD - T-Zell-Abklärung (T3): CD27, CD197, CD3, CD45RO, CD45RA, CD8, CD4, CD45.

- T/NK_CLPD - T/NK-Zell-Abklärung (T4), insbesondere bei V.a. TLGLL oder NK-Zell-Neoplasie:
cytPerforin, cytGranzym, CD3, CD16, CD94, CD8, CD4, CD45.

Zur Klonalitätsbeurteilung von TCR gamma/delta negativen auffälligen T-Zellpopulationen wird folgendes Panel angesetzt:
T1_TCRcB1: CD7, TCRcB1, CD3, CD2, CD5, CD8, CD4, CD45.
Bei Unklarheiten kann zur genaueren Abklärung noch die Klonalitäsanalyse der beta-Kette folgen (siehe Packungsbeilage) oder eine molekularbiologische T-Zellklonalitätsanalyse ergänzt werden.

Allgemeiner Hinweis: Die Entscheidung über Notwendigkeit und Art einer durchflusszytometrischen Analyse wird in Zusammenschau mit der Zuweisungsdiagnose, dem Differentialblutbild und der Zytomorphologie, ggf. nach Rücksprache mit dem Einsender, im Labor getroffen.

Prinzip des Verfahrens Analyse von Einzelzellen in Suspension auf Grundlage von Streulicht- und Fluoreszenzeigenschaften. Antigene (sogenannte CD-Marker = cluster of differentiation) an der Zelloberfläche und im Zellinneren werden durch fluoreszierende Antikörper markiert, durch einen Hüllstrom (Sheath Flüssigkeit) fokussiert und als Einzelzellen an einer Lichtquelle (Laser) vorbeigeführt. Die dadurch emittierten Lichtsignale werden mit Hilfe verschiedener Photomultiplier (PMTs) in elektronische Signale umgewandelt und als Messdaten gespeichert. Zusätzlich wird die Streuung des Anregungslichtes als Forward Scatter (FSC; entspricht der Größe der Zelle) und Side Scatter (SSC; entspricht in etwa der Granularität und Struktur der Zelle) gemessen.
An den im ZIMCL eingesetzten Flowzytometern können durch drei verschieden Laser (488nm (blau), 633nm (rot), 405nm (violett)) acht verschiedene Fluorochrome angeregt werden.
Durch die Analyse einer Vielzahl von Zellen können bei der anschließenden Auswertung der Daten verschiedene Zellpopulationen definiert werden. Aus Vollblut, Knochenmarkaspiraten und Punktaten werden Leukozytensubpopulationen relativ zu den Gesamtleukozyten quantifiziert. Im peripherem Blut werden die Leukozytensubpopulationen auch absolut quantifiziert (Dual platform Methode).

Literatur Thomas L. Labor und Diagnose. aktuelle Auflage
Roland Fuchs et al.: Manual Hämatologie, Nora-Verlag, aktuelle Auflage
WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues; aktuelle Auflage

Ergebniseinheit %

Einheiten(sonstige) Absolut-Resultate: Zellen/µl; Relativ-Resultate: % der jeweiligen Referenzpopulation (am Befund spezifiziert)

Synonyme FACS-Analyse; Immunologische Zelltypisierung; Immunphänotypisierung
Lymphozytentypisierung

Analysenfrequenz täglich, außer Wochenende

Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
(Stunden, Tage) 24 h

Spezimen
(Plasma, Serum, Harn) Nativblut mit K-EDTA, Knochenmark-Aspirat, Liquor oder Punktat

Sammelperiode nicht zutreffend

Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation) 500 µl

Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe K-EDTA Monovette

Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe(sonstige) Knochenmark-Spritze mit Heparin, Liquor, Punktat oder BAL (broncho-alveoläre Lavage) ohne Zusatz

Spezielle Präanalytik - Probentransport - Für Analysen aus peripherem Blut: Venenpunktion oder kapilläre Abnahme; Transport über Rohrpost bzw. Postversand bei Raumtemperatur
- Für Analysen aus Knochenmark: Knochenmarkpunktion; Transport durch BMA bzw. Postversand bei Raumtemperatur

Messbereich Analyt- und Epitopspezifisch

Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie) Normoblasten; Makroplättchen; Megakaryozyten; Lyse-resistente Erythrozyten;

Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch) unspezifische Bindung der Antikörper möglich, oft patientenspezifisch

Kennzeichnung des Analyse-Verfahrens nach MPG / IVDR Analyse-Gerät, Reagenzien und Antikörper CE-IVD-zertifiziert

Erklärung nach IVDR 2017/746
(für in-house Methoden) ERKLÄRUNG nach Art. 5 (5) der EU-Verordnung über In-vitro-Diagnostika (EU) 2017/746 (IVDR) zur Eigenherstellung eines IVD in Gesundheitseinrichtungen:

Wir erklären in alleiniger Verantwortung, dass das unten angeführte Produkt, welches im Wege der Eigenherstellung von uns hergestellt wird, allen Anforderungen der IVD-Verordnung (EU) 2017/746, Anhang I Grundlegende Sicherheits- und Leistungsanforderungen, entspricht, die anwendbar sind:

Das Produkt wurde in unseren eigenen Räumlichkeiten von uns in nicht industriellem Maßstab gefertigt und wird ausschließlich in unserer Gesundheitseinrichtung betrieben.

Gesundheitseinrichtung: Tirol Kliniken, Anichstr. 35, 6020 Innsbruck
Geschäftsführer: Mag. Stefan Deflorian
Leiter Qualitätsmanagement: Martin Weichselbraun, MSc.

Produktname: Flowzytometrie, T-/NK-Zell Spezifizierung

Ort und Datum der Erstellung: Innsbruck, am: 27.10.2020

Produktklassifizierung nach Anhang VIII: Klasse: Klasse C

Ausdruck gültig am 12.02.2025

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